在蛇的繁殖季节，雌蛇尾基部的一种腺体能散发出特殊的气味，雄蛇凭借这种气味追踪雌蛇。雄蛇有一对交接器，即所谓"半阴茎"，平时收缩至易尾基部内，交配时可从泄殖孔伸出，每次交配时只使用一侧的"半阴茎"。交配时，两蛇相互紧紧缠绕如油条状，头部在同一方，雄蛇身剧烈抖动，雌蛇则伏地不动，射精后雌雄蛇分开。
在每年的繁殖季节，一条雄蛇可与几条雌蛇交配。雌蛇虽然只有一次性接受交配，但存于雌蛇泄殖腔内的精子在3年内仍有受精能力。因此，人工饲养中，公、母蛇比例1:8便可。
玉米锦蛇每年3-5月交配繁殖，雌蛇每次产3-40枚卵，孵化期约60-65天，卵于7-9月间孵化，小蛇的性别像大多数爬行动物那样取决于气温（高雄低雌），2-3岁性成熟，寿命12-15年，最高纪录23年。蛇蛋蛋壳呈白色，如鹌鹑蛋一般大小，而破壳后的小蛇有红色和白色两种。
